登革1型病毒NS1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

作者：梅竹; 邓永强; 曹飞; 于曼; 朱舜亚; 秦成峰; 秦鄂德

来源：Y201006021, 2010, 35(06): 659-661.

• 登革热病毒
• 病毒非结构蛋白质类
• 重组表达
• 抗体 dengue virus
• nonstructural protein 1 (NS1)
• recombinant expression
• antibodies

目的重组表达登革1型病毒NS1蛋白并制备多克隆抗体。方法通过RT-PCR扩增编码登革1型病毒NS1蛋白的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)后经酶切测序鉴定,获得重组质粒pET-NS1。进一步使用IPTG诱导表达,经免疫印迹鉴定后,采用蛋白浸提方法从SDS-PAGE胶中纯化回收融合蛋白,并通过透析对目的蛋白进行复性;纯化复性后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接免疫荧光法测定抗体效价。结果成功构建了高效表达登革1型病毒NS1蛋白的原核表达载体,表达的重组NS1蛋白占菌体蛋白总量的50%以上,以包涵体形式存在;免疫印迹表明表达的重组NS1蛋白能够为登革病毒兔抗血...

• 单位
  病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院