甲型副伤寒沙门氏菌ompW基因功能的初步研究

作者：陈沁; 李娜; 梁昊宇; 王斌; 魏华; 曾明

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2012, (01): 6-11.

• 甲型副伤寒沙门氏菌
• ompW
• 基因敲除
• 功能研究

目的利用λRed重组系统敲除甲型副伤寒沙门氏菌ompW基因构建突变株,并且制备相应的回复株,进而初步研究该基因的功能。方法 PCR扩增得到上、下游同源臂,与卡那霉素抗性基因片段共同构建打靶片段,将其浓缩后转化含λRed重组系统的甲型副伤寒沙门氏菌(50973株),经PCR鉴定后得到突变株;将重组酶表达质粒pACU184与ompW基因的调控区和编码区序列连接后电转入突变株中,双酶切鉴定得到相应的回复株;SDS-PAGE及Western blot鉴定野生株、突变株与回复株中OmpW蛋白的表达情况;生化鉴定野生株、突变株与回复株,并观察野生株与突变株生长曲线的差异;测定野生株、突变株与回复株活菌半数致死量(LD_(50)),以此来观察ompW基因与细菌毒力的相关性。结果在甲型副伤寒沙门氏菌50973株中成功敲除了ompW基因,并构建了相应回复株;野生株与回复株均可表达出OmpW蛋白,突变株没有出现该蛋白的表达;野生株、突变株与回复株生化鉴定结果均为甲型副伤寒沙门氏菌,且野生株和突变株生长无明显差异;三者LD_(50)均不存在显著差异。结论甲型副伤寒沙门氏菌的ompW基因与该菌致病毒力无相关性,但突变株的构建为后续研究该基因具体功能提供了基础。

• 单位
  南昌大学食品科学与技术国家重点实验室; 中国食品药品检定研究院