利用CRISPRCas9技术创建拟南芥Argonaute2基因缺失突变体

作者：李红英; 高延武; 于茹恩; 王政博; 李雪萍; 刘龙昌^*

来源：浙江农业学报, 2021, 33(11): 2001-2008.

• Argonaute2
• 拟南芥
• 突变体
• 花序浸染法
• 基因编辑
• CRISPRCas9

Argonaute2(AGO2)在植物抗病和发育过程中发挥重要作用。为创制拟南芥ago2核苷酸插入/缺失突变体材料,分析了拟南芥AGO2基因结构,选择其外显子上3个靶点构建了CRISPRCas9基因编辑载体,并通过农杆菌介导的花序浸染法转化野生型拟南芥,利用潮霉素对T0代种子进行筛选,获得62株T1代抗性苗;然后提取T1代抗性苗DNA,进行潮霉素特异引物PCR扩增检测,确定获得53棵转基因阳性苗。随机选择10株T1代阳性苗,扩增包含靶点的基因片段进行测序,结果显示,在第1个靶点附近6株苗产生了编辑,第2靶点附近10株苗全部成功编辑,第3个靶点未发生编辑。编辑位点附近产生了多种编辑形式,以PAM前删除或者增加1个碱基的形式出现频率最高,也有删除大于10碱基的编辑形式,最长可删除106个碱基。这些突变株系的获得为深入研究拟南芥AGO2的功能提供了丰富的遗传材料。

• 单位
  河南科技大学; 园艺与植物保护学院