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摘要
猪δ冠状病毒(PDCoV)是1种新型猪冠状病毒，该病毒对各年龄段的猪均易感，尤其是对新生仔猪具有较高的致病性，可引起严重腹泻和高病死率。为获得抗PDCoV NS7和NS7a蛋白的单克隆抗体，先以PDCoV-GX2021-1毒株为模板扩增目的基因并构建原核表达载体，经IPTG诱导表达和SDS-PAGE切胶洗脱方法纯化目的蛋白。再按照免疫程序免疫小鼠并运用间接免疫荧光试验检测小鼠血清中特异性抗体；将血清阳性的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合后进行亚克隆筛选，获得1株可持续传代并产生抗NS7和NS7a蛋白抗体的单克隆杂交瘤细胞(命名为1-A08)。运用间接免疫荧光试验鉴定该单抗可特异性标记PDCoV感染细胞，Western blot和IP试验发现该单抗可特异性结合NS7和NS7a蛋白。此外，通过Western blot试验鉴定出该单抗的B细胞线性表位为111PSTLEED117。将该单抗的抗原表位序列与NCBI中发布的168株PDCoV NS7蛋白这一区域的氨基酸序列进行比对分析，发现该单抗的抗原表位较为保守，与其中160株的氨基酸序列一致。
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