丙酮酸激酶M2亚型在肾癌迁移侵袭中的作用及其机制

作者：王新君; 白培明; 赵晓昆; 罗广承

来源：中华实验外科杂志, 2017, 34(12): 2057-2059.

• 肾透明细胞癌
• 丙酮酸激酶M2亚型
• 迁移
• 侵袭
• 上皮-间充质转化

目的探讨敲低丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)对肾癌细胞株ACHN迁移侵袭的影响及其机制。方法构建靶向PKM2基因的pLV载体,筛选稳定转染的细胞株。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测敲低PKM2对ACHN细胞增殖的影响。在Transwell小室的上室和下室之间不放置基质胶测定细胞的迁移能力,在Transwell小室的上室和下室之放置基质胶测定细胞的侵袭能力。通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot的方法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的变化。结果 CCK-8实验结果显示敲低PKM2抑制了ACHN的增殖。对照组的葡萄糖消耗率和乳酸生成率分别为(3.493±0.179)和(3.553±0.185)nmol/106 cells/min,而shPKM2组的葡萄糖消耗率和乳酸生成率分别为(1.457±0.081)和(5.820±0.352)nmol/106 cells/min(P=0.001,P=0.005)。Transwell迁移实验结果显示shPKM2组和对照组到达下室的细胞数分别为(62±6)个和(39±5)个(P=0.001)。Tanswell侵袭实验结果显示shPKM2组和对照组到达下室的细胞数分别为(40±7)个和(26±6)个(P=0.009)。通过Western blot和RT-qPCR检测shPKM2组中E-cadherin蛋白和mRNA的相对表达量分别为1.560±0.110和2.534±0.342,而对照组中E-cadherin蛋白和mRNA的相对表达量分别为0.833±0.070和1.312±0.284(P=0.001,P=0.009),shPKM2组中Vimentin蛋白和mRNA的相对表达量分别为0.340±0.110和1.631±0.123,而对照组中Vimentin蛋白和mRNA的相对表达量为0.653±0.100和3.530±0.511(P=0.022,P=0.003)。结论敲低PKM2表达显著抑制了肾癌细胞的有氧糖酵解、增殖、迁移和侵袭能力,并影响了上皮-间充质转化(EMT)过程。

• 单位
  厦门大学附属中山医院; 中南大学湘雅二医院