EvaGreen实时荧光定量PCR检测猪细小病毒方法的建立

作者：容新宗; 杨春; 郑朝共; 刘波; 袁源; 苗松; 何太平

来源：中国输血杂志, 2012, (11): 1173-1175.

DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2012.11.027

• EvaGreen
• 猪细小病毒
• 血液制品
• 病毒/去除
• 实时荧光定量PCR

目的建立以EvaGreen为染料的实时荧光定量PCR检测猪细小病毒(PPV)的方法,为血液制品中病毒去除效果的工艺验证提供高效准确的技术平台。方法根据PPV的VP2基因保守序列,设计并合成引物。对目的片段进行PCR扩增,将扩增的PPV病毒VP2基因片段克隆入PMD19-T载体,重组质粒PMD19-T-VP2经测序鉴定正确后,作为标准品模板,用于标准曲线的绘制和该实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性和重复性检测的材料。结果应用重组质粒PMD19-T-VP2制作的荧光定量PCR扩增曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系;该方法检测灵敏度的下限能达到102copies/μl;与其他DNA病毒和同...

• 单位
  四川大学; 成都蓉生药业有限责任公司