小鼠抗人B7-1单克隆抗体抑制肿瘤细胞增殖的蛋白质组学分析

作者：沈立军; 朱雪梅; 邱玉华^*

来源：中国免疫学杂志, 2022, 38(13): 1537-1543.

• B7-1
• 单克隆抗体
• 共刺激信号
• 增殖
• Label-free定量蛋白质组学
• 信号通路

目的：研究鼠抗人单克隆抗体B7-1对恶性肿瘤细胞株Daudi（天然表达B7-1分子）体外生长、蛋白表达谱及信号通路的影响。方法：(1)采用诱生腹水法制备小鼠抗人B7-1单克隆抗体（4E5 mAb），应用Protein A免疫层析法进行亲和纯化，流式细胞术对其纯化后产物的活性进行识别鉴定；(2)利用MTT法检测不同浓度的4E5 mAb(5、10、20、40μg/ml)对Daudi细胞体外增殖的影响；(3)应用Label-free蛋白定量技术分析比较4E5 mAb(20μg/ml)处理Daudi细胞48 h后与其对照组（同型对照IgG）蛋白质的差异表达情况，采用平行反应监测（PRM）对差异表达蛋白进行定量验证；(4)根据蛋白质的GO注释和生物信息学工具KEGG数据库将鉴定出来的差异蛋白质进行生物信息学富集分析。结果：(1)获得单克隆抗体的量为3.83 mg/ml，该抗体与Daudi肿瘤细胞的阳性结合率为93.7%；(2)当抗体终浓度为20μg/ml时，4E5 mAb显著抑制Daudi细胞的增殖；(3)与IgG对照组相比，4E5实验组鉴别出169个蛋白质的定量水平差异有统计学意义，其中131个蛋白质表达呈上调趋势，38个蛋白表达水平呈下调趋势，PRM对差异蛋白定量验证的结果与蛋白组学结果完全一致；(4)GO数据库分析的差异表达蛋白主要来自线粒体、内质网膜、高尔基体、核质等细胞器，其中又以线粒体附近分布最多，多数参与线粒体翻译延伸和终止、细胞增殖、mRNA剪接、翻译、细胞内蛋白运输等功能。生物信息学工具KEGG富集分析显示差异蛋白主要参与Daudi细胞增殖相关的通路，如PI3KAkt、Ras、DNA replication、AMPK、mTOR、Hippo、VEGF、FoxO、Metabolic等。结论：小鼠抗人B7-1 mAb不仅可以通过与肿瘤细胞膜表面的B7-1分子特异性结合进行相互作用，还能显著抑制天然表达B7-1分子的肿瘤细胞的增殖，且与B7-1 mAb结合后明显改变了肿瘤细胞中蛋白表达谱及与增殖相关的信号通路。

• 单位
  苏州大学