奶牛乳房炎四种致病菌PCR核酸免疫层析试纸条快速检测方法的建立及应用

作者：陈诗胜; 张正荣; 任建鸾; 曾德新; 薛峰^*; 蒋原; 郭德华; 戴建君

来源：中国兽医科学, 2020, 50(03): 283-293.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0032

• 奶牛乳房炎
• PCR
• 胶体金
• 检测

为了开发检测导致奶牛乳房炎的无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和停乳链球菌这四种重要致病菌的PCR核酸免疫层析试纸条方法,本研究采用柠檬酸还原法制备10 nm的胶体金溶液,选用优化的10μL 1 mol/L碳酸钾溶液调节pH和5μL异硫氰酸荧光素抗体偶联金颗粒,并使用优化的封闭液(10%BSA、0.25%PEG2000、0.05%吐温-20、0.05%Triton-X100)进行封闭,将地高辛抗体和山羊抗鼠二抗分别喷涂在检测线和质控线上,烘干并组装成试纸条,进行细菌的纯培养物和鲜牛奶加样检测。结果显示,所制备的PCR核酸免疫层析试纸条和凝胶电泳均具有较好的特异性,最低检测限要比凝胶电泳高10倍,在模拟污染牛奶样品测试中,试纸条仍然具有很好的特异性且灵敏度比凝胶电泳的高。上述结果表明,本研究建立的PCR核酸免疫层析试纸条检测方法具有良好的临床应用潜力。

• 单位
  南京农业大学