Rap1GAP激酶通过AMPK信号通路影响宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移的研究

作者：李金秋; 王玲; 秦祥川; 阿仙姑·哈斯木^*

来源：解放军医学院学报, 2023, 44(03): 254-260.

• 宫颈癌
• Rap1酶激活蛋白
• 增殖
• 侵袭
• 迁移

背景 肿瘤细胞快速增殖和难以控制的盆腔淋巴结转移是造成晚期宫颈癌患者死亡的主要原因。Rap1 GTP酶激活蛋白(Rap1 GTPase-activating protein,Rap1GAP)低表达与肿瘤细胞增殖、侵袭和患者不良预后相关。目的 探讨Rap1GAP对宫颈癌细胞SiHa、C33a增殖、侵袭和迁移的影响及潜在的分子机制。方法 从UCSC(https://xenabrowser.net)数据库中下载经统一标准化的泛癌数据集：TCGA TARGET GTEx (PANCAN,N=19 131,G=60 499)，从中提取ENSG00000076864 (Rap1GAP)基因在宫颈癌样本中的表达数据，对每一表达值进行log2(x+0.001)变换，得到Rap1GAP基因的表达；采用Western blot检测RAP1GAP在宫颈癌细胞SiHa、C33a和正常宫颈内皮细胞H8中的表达水平，通过慢病毒转染SiHa、C33a细胞分别上调/下调Rap1GAP的表达，根据不同处理分为正常对照组(SiHa、C33a细胞)、空载组(NC-Rap1GAP)、OERap1GAP组(过表达Rap1GAP)和sh-Rap1GAP组(低表达Rap1GAP)，并验证细胞转染效率；采用平板克隆实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力；采用Western blot及qRT-PCR检测上调/下调Rap1GAP表达后各组细胞中Rap1GAP、E-cadherin、N-cadherin蛋白及mRNA的表达；采用Western blot检测磷酸化AMPK (p-AMPK)、AMPK蛋白表达水平。结果 从数据库观察到Rap1GAP在宫颈癌组织中的表达显著高于其在正常宫颈组织中的表达(P<0.05)。Western blot结果显示，与H8细胞比较，C33a细胞中Rap1GAP蛋白表达增高，SiHa细胞中Rap1GAP蛋白表达降低(P<0.05)。与SiHa组比较，OE-Rap1GAP组细胞集落形成能力、侵袭和迁移能力降低。与C33a组比较，sh-Rap1GAP组细胞集落形成能力、侵袭和迁移能力增强。Western blot及qRT-PCR实验结果表明，与SiHa组比较，OE-Rap1GAP组细胞内Rap1GAP、E-cadherin蛋白及mRNA表达升高，而N-cadherin、p-AMPK蛋白及mRNA表达降低(P<0.01)；与C33a组比较，sh-Rap1GAP组细胞内Rap1GAP、E-cadherin蛋白及mRNA表达降低，而N-cadherin、p-AMPK蛋白及mRNA表达升高(P<0.01)。结论 Rap1GAP抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移能力，可能与AMPK信号通路有关。

• 单位
  新疆医科大学; 基础医学院