肾癌G250启动子及肿瘤细胞p53突变双重调控的表达Ki67-siRNA的增殖腺病毒的构建

作者：禚保彪; 李海龙; 刘俊杰; 徐为; 高超; 郑骏年

来源：中华实验外科杂志, 2009, (10): 1258-1260.

• 肾癌
• 启动子
• 腺病毒
• RNA干扰

目的构建一种受肾癌G250启动子及肿瘤细胞p53突变双重调控的表达Ki67基因小干扰RNA(Ki67-E1B 55kDsiRNA)的新型增殖腺病毒。方法将含有H1启动子的Ki67-siRNA表达框插入E1B 55kD缺失增殖腺病毒载体pZD55中,构建pZD55-Ki67质粒。用G250启动子取代pZD55-Ki67的E1A启动子,构建双调控增殖腺病毒载体pZD-G250-Ki67。将pZD-G250-Ki67与腺病毒右臂质粒pBHGE3共转染293细胞,9～12d后出现病毒空斑。提取重组腺病毒的DNA、聚合酶链反应(PCR)鉴定正确者即为条件增殖腺病毒ZD-G250-Ki67。鉴定、扩增、纯化、测病毒滴度。结果成功构建G250启动子调控E1B 55kD蛋白编码基因缺失的表达Ki67-siRNA的双调控增殖型腺病毒ZD-G250-Ki67。病毒滴度为2×10~(11) PFU/ml。结论成功构建的ZD-G250-Ki67为利用Ki67-siRNA靶向肾癌治疗奠定基础。

• 单位
  徐州医学院附属医院; 徐州医科大学