下调miR-32-5p表达对顺铂耐药肺癌细胞化疗敏感性的影响及其机制

作者：史明; 陈兴; 李丁

来源：山东医药, 2020, 60(07): 43-48.

• 肺癌
• 微小RNA-32-5p
• 顺铂
• 化疗敏感性

目的探讨下调微小RNA-32-5p(miR-32-5p)表达对顺铂(DDP)耐药肺癌细胞化疗敏感性的影响及其机制。方法体外培养人肺癌细胞系A549、SPC-A-1、H226(以下分别称A549、SPC-A-1、H226细胞)和人正常肺支气管上皮细胞系BEAS2B(以下称BEAS2B细胞),采用RT-qPCR法检测miR-32-5p表达,选择miR-32-5p相对表达量最高的肺癌细胞进行后续实验。采用药物持续接触、浓度递增诱导法筛选DDP耐药肺癌细胞。采用MTS法检测肺癌细胞及其DDP耐药细胞DDP半数抑制浓度(IC50),采用RT-qPCR法检测肺癌细胞及其DDP耐药细胞miR-32-5p表达。选择上述DDP耐药肺癌细胞,随机分为观察组和对照组,分别转染miR-32-5p inhibitor、NC inhibitor,采用RT-qPCR法验证转染效率,采用MTS法检测两组DDP IC50,采用流式细胞仪检测两组细胞凋亡率,采用Western blotting法检测两组Bax、Bcl-2蛋白表达。通过Target Scan7. 2软件预测miR-32-5p的靶基因。取DDP耐药肺癌细胞,随机分为miR-32-5p mimic-TCF21-wt组、miR-32-5p inhibitor-TCF21-wt组、miR-32-5p mimic-TCF21-mut组、miR-32-5p inhibitor-TCF21-mut组,相应转染miR-32-5p mimic或miR-32-5p inhibitor、p GLO-TCF21-wt或p GLO-TCF21-mut,采用双荧光素酶报告基因实验检测各组荧光素酶活性。结果 A549、SPC-A-1、H226细胞miR-32-5p相对表达量均高于BEAS2B细胞,且A549细胞miR-32-5p相对表达量高于SPC-A-1、H226细胞(P均<0. 05)。故选择A549细胞进行后续实验。A549细胞与DDP耐药A549细胞的DDP IC50分别为(2. 92±0. 18)、(15. 47±3. 01)μg/m L,miR-32-5p相对表达量分别为1. 00±0. 03、12. 35±2. 87,二者比较P均<0. 05。观察组与对照组miR-32-5p相对表达量分别为0. 27±0. 08、1. 00±0. 05,DDP IC50分别为(7. 43±1. 25)、(16. 22±2. 54)μg/m L,细胞凋亡率分别为(7. 69±0. 24)%、(2. 35±0. 18)%,两组比较P均<0. 05。观察组Bax蛋白相对表达量高于对照组,Bcl-2蛋白相对表达量低于对照组(t分别为5. 28、9. 54,P均<0. 05)。Target Scan7. 2软件在线预测显示,TCF21启动子区与miR-32-5p具有结合位点。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-32-5p mimic-TCF21-wt组荧光素酶活性低于miR-32-5p inhibitor-TCF21-wt组(P <0. 05),而miR-32-5p mimic-TCF21-mut组与miR-32-5p inhibitor-TCF21-mut组荧光素酶活性比较P>0. 05。结论下调miR-32-5p表达能够提高DDP耐药肺癌细胞化疗敏感性,其机制与靶向调控TCF21能够促进Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达,从而提高细胞凋亡率有关。

• 单位
  本溪市中心医院