小檗碱靶向HDAC/H3K9ac/KLF4抑制棕榈酸诱导的HepG2脂肪变性体外实验研究

作者：李经纬; 王子璇; 王梦雨; 黄瑞贤; 信丰智; 范建高; 汪保灿^*

来源：实用肝脏病杂志, 2021, 24(06): 790-794.

• Hep G2细胞
• 小檗碱
• 组蛋白去乙酰化酶
• 组蛋白H3第9位赖氨酸乙酰化
• Krüppel样因子4
• 体外

目的探讨小檗碱(BBR)调控HDAC/H3K9ac/KLF4对棕榈酸(PA)诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD细胞模型的保护作用及其可能的机制。方法应用PA诱导Hep G2细胞构建NAFLD细胞模型,采用油红O染色法测定细胞脂肪变,采用Western blot法检测细胞HDAC1、H3K9ac、KLF4、SREBP-1c和PPARγ表达,使用染色质免疫沉淀技术(Ch IP)测定KLF4启动子区H3K9ac水平,采用ELISA检测细胞培养上清细胞因子,采用Si RNA技术沉默KLF4基因验证BBR靶向HDAC/H3K9ac/KLF4对PA诱导的Hep G2细胞脂肪变的保护作用。结果与模型组比,BBR处理使PA诱导的Hep G2细胞脂质沉积显著改善,培养上清TNF-α、IL-1β和IL-6水平分别为(514.7±46.4) pg/ml、(241.5±37.7) pg/ml和(362.7±19.9) pg/ml,均显著低于模型组【分别为(1162.0±110.8) pg/ml、(635.8±73.4) pg/ml和(1110.0±85.1) pg/ml,P<0.001】;与模型组比,BBR干预组HDAC1蛋白表达降低了19.0%,而H3K9ac和KLF4蛋白表达增加了1.53倍和1.52倍,KLF4启动子区H3K9ac水平增加了3.97倍,脂质合成相关基因SREBP-1c蛋白表达降低了49.1%,脂质分解相关基因PPARγ蛋白表达增加了1.84倍;与空质粒转染组比,转染真核表达质粒细胞HDAC1蛋白表达水平增加了2.02倍,而H3K9ac蛋白表达水平降低了57.1%;与Si RNA-NC转染组比,转染Si RNA-KLF4的Hep G2细胞KLF4蛋白表达水平显著下降(P<0.01),而细胞脂质沉积显著增加,培养上清TNF-α、IL-1β和IL-6水平分别为(887.9±89.9) pg/ml、(471.9±38.4) pg/ml和(793.1±59.3) pg/ml,均显著高于Si RNA-NC转染组【分别为(534.2±46.1) pg/ml、(260.3±26.9) pg/ml和(372.0±30.6) pg/ml,P<0.01】,脂质合成相关基因SREBP-1c蛋白表达增加了1.77倍,而脂质分解相关基因PPARγ蛋白表达降低了41.6%。结论本研究结果提示BBR可能通过调节PA诱导的Hep G2细胞HDAC/H3K9AC表达,激活了KLF4,抑制了细胞内炎症反应和脂质沉积,为临床干预NAFLD提供了新的思路。

• 单位
  上海交通大学