摘要
AaPIF3是药用植物黄花蒿(Artemisia annua)中正调控青蒿素生物合成的一个bHLH转录因子,但其具体的调控机制并不清楚.综合采用分子生物学和生物化学方法研究AaPIF3调控青蒿素生物合成的机制,采用酵母单杂交(Yeast One-hybrid)技术研究AaPIF3与青蒿素生物合成途径中4个基因(ADS,CYP71AV1,DBR2和ALDH1)和AaERF1启动子的相互作用;采用实时荧光定量PCR技术检测AaERF1的表达量;采用双荧光素酶(Dual-Luciferase)技术研究AaPIF3对AaERF1的转录激活作用.结果表明, AaPIF3均不能与青蒿素生物合成途径中4个基因启动子中的顺式作用元件结合,但能与AaERF1启动子结合;过表达AaPIF3的青蒿中AaERF1的表达量为野生型对照的3.34~6.30倍;双荧光素酶实验表明, AaPIF3能显著提高AaERF1启动子活性,为对照的1.67倍.得出AaPIF3对青蒿素生物合成的调控是属于间接调控,其具体调控机制为AaPIF3通过直接转录激活AaERF1而参与青蒿素生物合成的调控.
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