PGRN过表达慢病毒载体的构建与鉴定

作者：李敬; 张玉英^*; 李树林; 李森; 刘春霄; 李家仪; 王红艳; 梁淑娟

来源：潍坊医学院学报, 2019, 41(04): 244-321.

DOI：10.16846/j.issn.1004-3101.2019.04.002

• 颗粒蛋白前体
• 过表达
• 慢病毒

目的构建针对颗粒蛋白前体(PGRN)基因的过表达载体,鉴定PGRN基因过表达效率,研究其对胃癌细胞的生物学效应的影响。方法 PCR扩增获得人EPO基因信号肽与PGRN成熟蛋白编码的融合序列,经酶切、连接到慢病毒载体Plenti6/V5上,通过菌落PCR、双酶切和DNA测序验证构建出Plenti6/V5-epo-PGRN载体,转染293T细胞的制备慢病毒。经纯化和病毒滴定后,感染BGC-823细胞并建立过表达胃癌细胞株,提取细胞总RNA和总蛋白,分别用RT-PCR法和WB法测定PGRN分子及蛋白过表达的水平,用MTT法和克隆形成检测细胞增殖能力。结果成功构建出PGRN过表达慢病毒载体,RT-PCR和WB分别显示过表达组BGC-823细胞表达PGRN的mRNA和蛋白较对照组明显增加,细胞增殖和克隆形成能力明显增强。结论构建的PGRN慢病毒过表达载体在分子与蛋白水平上明显上调BGC-823细胞株PGRN的表达,促进胃癌细胞的增殖。

• 单位
  潍坊市人民医院; 潍坊医学院