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摘要
目的观察雌二醇(E2)对增殖期ATDC5细胞的生长及c型利钠肽(CNP)信号通路蛋白[包括CNP、利钠肽B受体(NPR-B)及利钠肽c受体(NPR-C)]表达的影响。方法 以胰岛素(10g/ml)诱导分化第6天的ATDC5细胞为研究对象,观察E2对细胞生长的影响(MTT法)及CNP、NPR-B及NPR-C蛋白表达的影响(Western-blot法):(1)量效研究:分别加入7个不同浓度(10-110-5mol/L)的E2(浓度组)及DMSO溶剂(对照组)共8组,比较作用24h后各组细胞数吸光度(A)值及作用48h后各组细胞的蛋白水平;(2)时效研究:加E2(10-8mol/L)作用不同时间(0、24、48、72、96、120h)(6组),除Oh外,各时间点均设相应溶剂对照组。比较不同时间点细胞数与其对照组的差值;比较096 h细胞蛋白水平;(3)雌激素受体阻断试验:分别加入E:(10-8mol/L)(E2组)、雌激素受体阻断剂ICI 182782(107mol/L)(ICI组)、E2(10-8mol/L)和ICI 182780(10-7mol/L)(E2+ICI组)以及溶剂DMSO(对照组),比较作用24 h后4组细胞数。结果 (1)量效研究:①作用24h后,与对照组(0.38±0.02)相比,随E2浓度增大,ATDC5细胞数呈增加趋势,至浓度为1019和10-8mol/L时最为显著(A值分别为O.56±0.06和0.52±0.02,p值分别<0.05和<0.01);②作用48h后,与对照组相比,各浓度组细胞CNP、NPR-B及NPR-C蛋白水平均显著增加(P均<0.01),CNP和NPR-B蛋白增加以10-10。mol/L组最为显著,NPR-C蛋白增加以10-9mol/L组最为显著。(2)时效研究:①E2(10-8mol/L)分别作用2496 h后,各时间点细胞数均较对照组增多,48h时最为显著(O.030±0.003),随后逐渐减少(P<0.05或P<0.01),至120 h时(0.007±O.001)与对照组差异无统计学意义。②CNP水平在24 h时显著增加(P<0.05),48 h和72 h时有增加趋势,96h时则有降低趋势。NPR-B和NPR-C蛋白水平在24 h时均有增加趋势(P分别为O.060和O.055),48h则均有降低的趋势,至72 h和96 h时均低于对照组(P均<O.05)。(3)雌激素受体阻断试验:作用24 h时,E:组、ICI组、(E2+ICI)组和对照组4组细胞数的差异有统计学意义(JP<O.05)。E2组(0.470±0.032)和(E2+ICI)组(0.410 4±0.018)均多于对照组(O.370±0.011),E2组多于(E2+ICI)组(P均<0.05);ICI组(0.360±O.035)与对照组差异无统计学意义。结论 E2能通过雌激素受体介导、以时效和量效作用方式促进增殖期ATDC5细胞生长。E2在一定浓度、不同作用时间时可以不同方式调节(上调或下调)CNP、NPR-B和NPR-C蛋白的表达,提示雌激素是CNP信号通路的调节因子之一。
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