多房棘球绦虫丝氨酸蛋白酶基因的克隆、表达及抗原性鉴定

作者：臧小燕; 田梦潇; 郭刚; 齐文静; 郭宝平; 李军; 李林^*; 张文宝^*

来源：中国病原生物学杂志, 2020, 15(10): 1151-1156.

DOI：10.13350/j.cjpb.201006

• 多房棘球绦虫
• 丝氨酸蛋白
• 原核表达
• Western blot
• 抗原性

目的克隆多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis, Em)丝氨酸蛋白酶(SP)基因,通过原核系统表达Em-SP并对其抗原性进行鉴定。方法 PCR扩增获得Em-SP片段;构建重组质粒pET30a-Em-SP,NdeI/HindIII双酶切并测序,将测序正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)菌株中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用SDS-PAGE电泳分析表达蛋白的分子质量单位和表达丰度。表达产物经亲和层析(Ni-IDA树脂)纯化后采用Western blot鉴定蛋白的反应原性。结果 PCR扩增SP基因片段为1 374 bp,重组质粒pET30a-Em-SP酶切后电泳和测序表明阅读框架序列与设计一致。IPTG诱导重组质粒转化菌表达蛋白主要以包涵体形式存在,表达蛋白的相对分子质量约为51×103,与预期值大小相符,且能被鼠抗His-Tag抗体识别,用包虫患者血清Western blot鉴定呈阳性。结论克隆的Em-SP基因在原核中成功表达,表达产物具有良好的反应原性,可作为诊断试剂的候选抗原。

• 单位
  新疆医科大学; 新疆医科大学第一附属医院; 基础医学院