微小RNA-362-5p通过靶向调控CYLD对胃癌细胞株SGC-7901生物学行为的影响

作者：宋亚锋; 肖飞; 李运奇; 徐媛

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(06): 1055-1058.

• 微小RNA-362-5p
• 胃癌
• Cylindromatosis

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-362-5p对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡的影响及其调控机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测人胃癌细胞株和正常胃黏膜细胞中miR-362-5p的表达;采用脂质体瞬时转染技术转染miR-362-5p抑制物;噻唑蓝(MTT)法检测miR-362-5p对胃癌细胞株SGC-7901增殖能力的影响;流式细胞术检测miR-362-5p对胃癌细胞周期和凋亡的影响;利用Targetscan信息学预测软件预测miR-362-5p靶向调控Cylindromatosis(CYLD)基因,构建携带CYLD野生型及突变型3’非翻译区(3’UTR)野生型和突变型荧光素酶报告载体,并利用双荧光素酶活性分析检测;Western blot检测miR-362-5p对CYLD蛋白表达的调控作用。结果 miR-362-5p在胃癌细胞株SGC-7901、AGS、MKN28的表达水平分别为6.27±0.70、4.63±0.35、5.53±0.45,明显高于胃黏膜细胞(P=0.006、0.003、0.003)。转染miR-362-5p抑制物后,胃癌细胞SGC-7901中miR-362-5p表达水平下降[miR-362-5p-IN组(0.41±0.07),miR-362-5p NC组(0.84±0.07),P=0.022]。下调miR-362-5p后显著抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖[48 h(吸光度值):miR-362-5p-IN组:0.28±0.02,miR-362-5p NC组:0.45±0.04,P=0.028;72 h(吸光度值):miR-362-5p-IN组:0.33±0.02,miR-362-5p NC组:0.61±0.04,P=0.003];下调miR-362-5p后流式细胞术结果显示胃癌细胞G1/G0期比例增加[miR-362-5p-IN组:(78.04±3.74)%,miR-362-5p NC组:(67.86±3.35)%,P=0.017],凋亡增加[miR-362-5p-IN组:(33.29±4.86)%,miR-362-5p NC组:(18.20±0.80)%,P=0.040]。双荧光素酶报告基因实验验证CYLD是miR-362-5p的潜在靶基因。Western blot法检测结果显示CYLD蛋白水平与miR-362-5p表达呈负相关。结论miR-362-5p可通过靶向负调控CYLD蛋白,促进胃癌细胞的增殖,抑制细胞凋亡,进而促进胃癌的发生发展。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属普爱医院