4型流感病毒疫苗株在MDCK细胞中增殖条件的优化

作者：江征; 张国梅; 张哲罡; 邓涛; 刘京; 吕传硕; 乐洋; 马宁; 周蓉; 张家友; 李长贵; 杨晓明^*

来源：中国生物制品学杂志, 2021, 34(10): 1151-1156.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003441

• 流感病毒
• MDCK细胞
• 胰酶
• 增殖

目的优化4型流感病毒疫苗株H1N1(IVR-215)、H3N2(NIB-121)、BV(BVR-11)、BY(BVR-1B)在稳定表达牛胰蛋白酶原的MDCK细胞(MTY6)和MDCK细胞中的增殖条件,并比较MTY6和MDCK细胞培养不同型别流感病毒的差异。方法以血凝滴度和病毒滴度[半数组织感染剂量(median tissue culture infective dose,TCID50)]为指标,通过棋盘法对4型流感病毒疫苗株在MTY6和MDCK细胞上种毒的MOI(10-1、10-2、10-3、10-4)、胰酶终浓度(0.5、1、1.5、2μg/mL)及收毒时间(0、24、48、72、96 h)进行优化;以接毒后细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)为指标,分析两种细胞对不同型别流感病毒的敏感性。结果 H1N1、H3N2、BV和BY株病毒在MTY6细胞中培养的最适MOI分别为10-4、10-4、10-2、10-2,胰酶终浓度分别为0.5、1、0.5、0.5μg/mL,收毒时间分别为96、72、48、72 h。H1N1、H3N2、BV和BY株病毒在MDCK细胞中培养的最适MOI均为10-4,胰酶浓度为0.5、1、0.5和1.5μg/mL,收毒时间为96、48、72和72 h。4型流感病毒疫苗株在MTY6细胞中培养比在MDCK细胞中具有更高的血凝滴度和TCID50。在相同时间内,H1N1、H3N2、BY株病毒在MTY6细胞中比在MDCK细胞中能够引起更明显的CPE。结论成功优化了4型流感病毒疫苗株在MTY6细胞中的增殖条件,MTY6细胞与MDCK细胞相比,培养4型流感病毒疫苗株能够获得更高的病毒滴度,并增加病毒产量。本研究为MTY6细胞用于流感疫苗生产奠定了基础。

• 单位
  武汉生物制品研究所; 中国食品药品检定研究院