显微切割联合全自动Western blot在小鼠大脑标记神经元微量蛋白定量中的应用

作者：杨楠; 谭思维; 彭艳; 周元国; 宁亚蕾^*

来源：第三军医大学学报, 2018, 40(20): 1846-1850.

DOI：10.16016/j.1000-5404.201805035

• 激光显微切割
• 全自动毛细管Western blot
• 蛋白质定量

目的构建及评价收集特定部位的标记神经元,对这类神经元的微量蛋白水平采用定量的方法,并将此方法初步应用于小鼠颅脑创伤后海马亚区神经元中。方法硫堇染色未固定处理的冰冻切片脑组织神经元,激光显微切割收集海马CA1区和DG区神经元,全自动毛细管Western blot检测收集细胞的磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)蛋白水平。结果全自动毛细管Western blot对低浓度蛋白的检测下限低于传统Western blot 1个数量级,其线性相关系数为98. 85%,日内和日间精密度分别为2. 50%和4. 09%。本方法应用于颅脑创伤小鼠脑组织,发现伤后1 d海马DG区神经元p-PKA显著增高(P <0. 01),CA1区无变化。结论本方法基于激光显微切割和全自动毛细管Western blot,能够实现精确收集指定神经元并准确定量微量蛋白,成功应用于目标神经元蛋白定量,具有在细胞类型众多且混杂分布的组织中进行细胞和分子水平研究的应用前景。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 第三军医大学; 创伤、烧伤与复合伤研究国家重点实验室