黄芩-黄连抗神经炎症的配伍优势及其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的潜在靶点

作者：张红杰; 苏丹; 朱根华; 宋永贵; 周步高; 李珊珊; 章常华; 艾志福^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2022, 28(22): 58-67.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20222138

• 黄芩-黄连
• 配伍优势
• Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子-κB(TLR4/MyD88/NF-κB)
• 神经炎症
• 小鼠小胶质细胞(BV2)

目的：探索黄芩-黄连防治神经炎症的配伍优势，并基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路，阐明黄芩-黄连配伍优势的作用特点及机制。方法：选取体外具有代表性的小鼠小胶质细胞（BV2），将BV2分为8组，分别为正常组、模型组、黄芩-黄连组、吡拉西坦组、黄芩组、黄连组；利用细菌脂多糖（LPS）建立BV2细胞炎症模型，通过细胞增殖活性检测（CCK-8）试剂盒检测细胞活性；明场下观察细胞形态；酶联免疫吸附测定法（ELISA）、免疫荧光法测定药物对BV2细胞促炎因子产生及释放的影响；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达；细胞免疫荧光检测NF-κB p65核转位情况；通过TLR4信号转导抑制剂CLI-095、NF-κB阻断剂PDTC进行黄芩-黄连抗神经炎症作用靶点的确认。结果：与正常组比较，LPS诱导的模型组细胞大多处于激活状态，培养液及细胞内的IL-6、TNF-α、IL-1β含量显著升高（P<0.01）,TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65的mRNA表达显著升高（P<0.01）,NF-κB p65的入核现象明显；与模型组比较，黄芩-黄连、吡拉西坦组预处理后，BV2细胞形态大部分恢复，IL-6、TNF-α、IL-1β水平均显著降低（P<0.01）,TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65 mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,NF-κB p65大多存在于细胞质中；黄芩组、黄连组与模型组比较，细胞形态略有恢复，促炎因子水平及TLR4、MyD88、NF-κB p50、NF-κB p65 mRNA表达量有所降低；与黄芩-黄连组比较，黄芩组、黄连组的促炎因子抑制作用效果显著低于药对组；与模型组比较，应用信号通路特异抑制剂“黄芩-黄连+CLI-095”组、“黄芩-黄连+PDTC”组，能够明显降低TLR4、MyD88、NF-κB p50及NF-κB p65的mRNA表达（P<0.05,P<0.01），并明显抑制NF-κB p65转入细胞核内。结论：黄芩与黄连相须配伍后的抗神经炎症作用明显优于单味黄芩或黄连；该药对的抗神经炎症优势与抑制小胶质细胞中的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活密切相关；通过验证说明TLR4、MyD88、NF-κB为黄芩-黄连发挥药对配伍优势的潜在靶点。

• 单位
  江西中医药大学