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摘要
目的通过检测不同诱发途径建立的子痫前期模型孕鼠胎盘组织中长链脂肪酸β氧化关键酶长链-3-羟酰基辅酶A脱氢酶(LCHAD)基因位点甲基化程度的差异, 探讨多因素和多通路在子痫前期病理机制中的分子实验基础。方法按不同途径建立子痫前期孕鼠模型并分组如下:(1)左硝基精氨酸甲酯(L-NAME)组:给予孕鼠皮下注射L-NAME的方法建模;(2)脂多糖(LPS)组:给予孕鼠腹腔注射LPS的方法建模;(3)载脂蛋白C3 (ApoC3)组:给予存在脂代谢障碍的孕鼠皮下注射L-NAME的方法建模型;(4)β2糖蛋白Ⅰ(β-2GPI)组:给予孕鼠皮下注射β-2GPI不完全弗氏佐剂的方法建模。根据建模时间对L-NAME组、LPS组及ApoC3组孕鼠于妊娠第3、11、16天分别定为胚胎植入前期、子痫前期早发期和晚发期3个不同实验阶段, β-2GPI组孕鼠仅有植入前期, 对不同实验阶段的孕鼠胎盘LCHAD基因位点的甲基化水平进行检测。同时设生理盐水对照组, 以及应用ApoC3高表达转基因孕鼠作为对照的转基因对照组。结果 (1)各组孕鼠LCHAD基因发生甲基化的位点:在LCHAD基因转录起始位点上游728 bp的范围内, 共发现存在45个CG位点, 其中LCHAD基因CG-5、12、13、14、15、16、19、24、25、27、28、29、30、31、32、34、35、43为含有2个及以上CG序列的复合位点, 其他位点为仅含有1个CG序列的单一位点。L-NAME组、LPS组、ApoC3组和β-2GPI组孕鼠均有13个LCHAD基因位点发生甲基化改变, 其中, LCHAD基因CG-3、5、6、11、13、14、18、28位点呈不同程度的高甲基化状态;LCHAD基因CG-16、25、31、42、44位点呈不同程度的低甲基化状态;其余32个位点无甲基化改变。(2)各组孕鼠胎盘LCHAD基因位点甲基化水平比较:L-NAME组、LPS组、ApoC3组、β-2GPI组和转基因对照组孕鼠胎盘LCHAD基因CG-3、11、13、14、18位点的甲基化水平显著高于生理盐水对照组, 分别比较, 差异均有统计学意义(P<0.05);而LCHAD基因CG-42、44位点的甲基化水平显著低于生理盐水对照组, 分别比较, 差异有统计学意义(P<0.05)。(3)各组孕鼠LCHAD基因相同位点的甲基化水平比较:① L-NAME组孕鼠早发期LCHAD基因CG-3、11、18位点的甲基化水平显著低于植入前期及晚发期, LPS组孕鼠植入前期显著低于早发期及晚发期;而ApoC3组孕鼠植入前显著高于早发期及晚发期, 分别比较, 差异均有统计学意义(P<0.05)。② L-NAME组、LPS组不同实验阶段孕鼠LCHAD基因CG-5位点甲基化水平均显著高于生理盐水对照组, 而ApoC3组仅植入前及早发期高于生理盐水对照组, 分别比较, 差异均有统计学意义(P<0.05)。③ L-NAME组孕鼠不同实验阶段LCHAD基因CG-6位点甲基化水平显著高于其他各组, 分别比较, 差异均有统计学意义(P<0.05)。④ L-NAME组孕鼠LCHAD基因CG-13、14位点甲基化水平在植入前、早发期、晚发期呈逐渐升高趋势, LPS组孕鼠在植入前显著高于早发期、晚发期, 而ApoC3组孕鼠早发期的甲基化水平最高, 分别比较, 差异均有统计学意义(P<0.05)。⑤ L-NAME组孕鼠LCHAD基因CG-28位点甲基化水平在植入前、早发期、晚发期呈逐渐降低趋势, LPS组孕鼠早发期、晚发期甲基化水平高于植入前期, ApoC3组孕鼠早发期甲基化水平最高, 分别比较, 差异均有统计学意义(P<0.05)。⑥ ApoC3组孕鼠LCHAD基因CG-16、25、31位点甲基化水平显著高于其他各组, 分别比较, 差异均有统计学意义(P<0.05)。⑦β-2GPI组孕鼠LCHAD基因CG-42位点未检测到甲基化, 而其他各组CG-42位点呈低甲基化状态, β-2GPI组与其他各组的CG-42位点甲基化水平比较, 差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LCHAD基因CG-6、42位点甲基化可能分别与L-NAME、β-2GPI诱导的子痫前期孕鼠胎盘中LCHAD基因表达变化相关;LCHAD基因表达和甲基化在LPS和ApoC3转基因孕鼠中未见明显联系。不同诱发途径的子痫前期孕鼠LCHAD甲基化水平和表达存在的差异, 进一步揭示了多因素和多通路在子痫前期发病机制中的分子实验基础。
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