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摘要
目的 探讨一氧化氮(NO)对角膜神经再生的影响作用。方法 本研究以亚硝酸钠(NaNO2)作为外源性NO供体，在细胞实验中以小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a)为研究对象。采用不同浓度的NaNO2处理Neuro-2a细胞并筛选出NO的最佳神经营养浓度。在动物实验中，将30只SD大鼠随机分组，10只作为NC组，其余20只大鼠建立角膜碱烧伤模型，再随机分为PBS组和NO组，每组10只。从碱烧伤当天开始，PBS组给予PBS治疗，NO组给予10.00μmol·L-1 NaNO2与PBS混合治疗。用荧光素钠染色后观察并记录大鼠角膜上皮愈合情况，计算角膜上皮愈合率。用CCK-8检测细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，免疫荧光法检测细胞神经元标记物的表达。于大鼠角膜碱烧伤处理后7 d取大鼠角膜上皮组织，分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测每组角膜上皮中神经元标志物βⅢ-微管蛋白和神经生长因子(NGF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)的表达水平。结果 10.00μmol·L-1 NaNO2处理Neuro-2a细胞24 h后可显著提高细胞活性；使用浓度为0.00μmol·L-1、10.00μmol·L-1、1000.00μmol·L-1的NaNO2处理Neuro-2a细胞24 h后，测得细胞凋亡率分别为18.60%、13.00%、19.48%;与0.00μmol·L-1组相比，10.00μmol·L-1组细胞凋亡率降低(P<0.01)。与0.00μmol·L-1组相比，10.00μmol·L-1组Neuro-2a细胞βⅢ-微管蛋白、MAP2和SMI312三种神经元标志物相对表达量均增加(均为P<0.05)。碱烧伤后1 d、3 d、7 d,与PBS组相比，NO组大鼠角膜上皮愈合率均升高(均为P<0.05)。与NC组相比，PBS组和NO组大鼠角膜组织各神经营养因子mRNA的相对表达量均增高(均为P<0.05)。与PBS组相比，NO组大鼠角膜组织NGF、GDNF、CNTF mRNA的相对表达量均增高(均为P<0.05)。Western blot检测结果显示：碱烧伤后7 d,与NC组相比，PBS组和NO组大鼠角膜组织βⅢ-微管蛋白、NGF、GDNF、CNTF的蛋白表达水平均增高(均为P<0.05);与PBS组相比，NO组大鼠角膜组织βⅢ-微管蛋白、NGF、GDNF、CNTF蛋白的表达水平均明显增高，差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 气体信号分子NO能促进神经细胞的生长以及相关神经元标志物的表达；在大鼠角膜碱烧伤模型中，局部应用外源性NO进行治疗，可对角膜上皮和角膜神经产生明显的营养作用。
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