鸭坦布苏病毒分离鉴定及其囊膜蛋白遗传进化分析

作者：阴雅洁; 梁瑞英; 崔欢; 孟利佳; 倪维玲; 乔思娜; 郭康康; 张博; 李松励; 侯绍华^*; 董世山^*

来源：中国畜牧兽医, 2022, 49(04): 1497-1506.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2022.04.032

• 鸭坦布苏病毒(DTMUV)
• 分离鉴定
• 囊膜蛋白
• 遗传进化分析

【目的】了解并掌握鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus, DTMUV)流行特点及病毒生物学特性，为DTMUV防治提供理论依据和技术支撑。【方法】通过细胞及鸡胚接毒试验对河北某鸭场10只具有典型临床症状的发病鸭进行病毒分离，用RT-PCR、透射电镜观察、Western blotting及间接免疫荧光试验(IFA)等方法鉴定，进行动物回归试验测定病毒毒力并对其进行囊膜蛋白遗传进化分析。【结果】分离到的病毒可在DF-1细胞上稳定增殖产生典型细胞病变效应(CPE)并致死鸡胚；病毒纯化后经电镜观察可见直径30～60 nm的病毒粒子；RT-PCR结果显示，在约270 bp处可见单一条带，与DTMUV预期大小一致；Western blotting结果显示，在60 ku处有特异性条带，与E蛋白大小一致；IFA结果表明，接种病毒的DF-1细胞胞质中可见明亮的特异性荧光，以上结果均表明分离的病毒为DTMUV。将分离到的病毒命名为AX2020株，AX2020株经肌内注射感染北京鸭后感染率高达100%,发病鸭产生神经症状及腹泻等典型临床症状；经序列比对发现AX2020株和GA株(MK907880.1)相似性最高，与SD14毒株(MH748542.1)亲缘关系较远。与商品灭活疫苗毒株HB2010株(MN649262.1)和活疫苗毒株FX2010株(MH414568.1)相比，AX2020株第93、277和487位氨基酸发生了的突变。【结论】成功分离得到1株DTMUV AX2020株，分离毒株对北京鸭具有较强的致病性，AX2020株的囊膜蛋白与国内疫苗毒株相比，已经发生了氨基酸位点的突变，结果为鸭坦布苏病毒病的流行病学及后续疫苗相关研究奠定了一定的基础。

• 单位
  河北农业大学; 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所