维氏气单胞菌胞外产物HisJ基因的克隆与生物信息学分析及原核表达

作者：宋海超; 张冬星; 徐洋; 张海朋; 康元环; 钱爱东; 单晓枫^*; 李影^*

来源：中国兽医科学, 2018, 48(09): 1152-1159.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2018.0158

• 维氏气单胞菌
• 胞外产物
• HisJ蛋白
• 原核表达
• 免疫原性

为研究维氏气单胞菌胞外产物HisJ基因的可能相关功能,扩增HisJ基因,并通过同源性比较构建HisJ基因的系统进化树,利用相关软件对HisJ基因编码的蛋白进行生物信息学分析,并对HisJ基因进行原核表达以及表达产物的免疫原性进行检测。结果显示,HisJ基因全长774 bp,编码247个氨基酸,TH0426株HisJ与维氏气单胞菌属同一分支,具有信号肽、跨膜区,属于膜外蛋白,二级结构主要以α螺旋、无规则卷曲为主。经SDS-PAGE分析发现,重组菌可表达出融合性蛋白,并且以10‰的体积接菌、IPTG终浓度为1.0mmol/L诱导8 h表达效果最好。Western-blot分析结果显示,重组HisJ蛋白在大肠杆菌中被成功表达且能被小鼠抗HisJ蛋白血清识别,表明表达的HisJ蛋白具有一定的免疫原性。为进一步对HisJ蛋白的结构功能及与致病性、耐药性关系的研究奠定了基础。

• 单位
  浙江省淡水水产研究所; 吉林农业大学; 农业部