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摘要
[目的]克隆人细胞周期蛋白C基因(human cyclin C,CCNC),构建真核表达载体,诱导并鉴定其表达。[方法]利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法,以急性淋巴细胞性白血病细胞株6T-CEM mRNA为模板,扩增CCNC基因,将克隆获得的CCNC全长cDNA片段构建重组表达载体pCMV-tag2B-CCNC,用脂质体Lifefectamine2000将重组质粒转染至6T-CEM细胞系,诱导其表达,Western Blot鉴定其表达。[结果]电泳获得944bp预期序列,pCMV-tag2B-CCNC经双酶切鉴定及序列分析证实为正确的有完整读码框的CCNC基因,将pCMV-tag2B-Sorcin导入6T-CEM细胞并成功表达,目的蛋白经Western blot鉴定具有生物学活性。[结论]经测序及酶切鉴定,成功克隆了CCNC的cDNA,并成功构建了CCNC真核表达质粒pCMV-tag2B-CCNC,重组质粒能表达具有生物学活性的CCNC蛋白,为研究CCNC的功能打下了基础。
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