1株假单胞菌oprD基因缺失和回补载体的构建

作者：朱艳容; 刘志新; 杨靖; 韩韵; 陈果; 徐祥^*

来源：安徽农业科学, 2022, 50(02): 109-117.

• 假单胞菌
• 毒力因子
• 基因敲除
• 基因回补

[目的]构建假单胞菌毒性基因(oprD)缺失突变株,为进一步探讨其编码的毒力因子功能奠定基础。[方法]利用pEX18Gm质粒作为基因敲除的载体,构建假单胞菌oprD基因重组自杀质粒,通过同源重组并激活自杀基因方式,筛选到目的基因缺失的突变株,再利用pBBR1MCS-2质粒作为目的基因回补的载体,构建回补载体。[结果]同源重组后,经过庆大霉素和氯霉素双抗平板、蔗糖平板筛选和PCR鉴定,成功获得了oprD基因缺失突变株,类似操作获得了回补菌株。[结论]基因缺失突变株的成功构建可为下一步的毒性机理研究奠定基础。

• 单位
  湖北医药学院; 基础医学院; 长江水利委员会水文局