胆管癌组织钙依赖性蛋白激酶表达及其对HuCCT1血管生成的调控机制

作者：陆路; 黎东明; 吴晓勇; 王学国; 王太成; 赵红岩; 宋文渊^*

来源：中华实用诊断与治疗杂志, 2021, 35(04): 335-339.

DOI：10.13507/j.issn.1674-3474.2021.04.003

• 胆管癌
• 钙依赖性蛋白激酶
• 增殖
• 血管形成
• MEK/ERK信号通路

目的观察钙依赖性蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ, CaMKⅡ)在胆管癌组织中表达情况,探讨其对胆管癌细胞HuCCT1血管生成的影响及机制。方法 20例胆管癌患者,取其手术切除的胆管癌组织和癌旁正常组织。胆管癌细胞株HuCCT1随机分为空白对照组(正常培养)、siRNA-NC组(转染阴性对照siRNA-NC)和siRNA-CaMKⅡ组(转染siRNA-CaMKⅡ)。采用实时荧光定量PCR法检测2种组织和3组细胞CaMKⅡmRNA相对表达量;采用免疫组织化学法检测2种组织CaMKⅡ蛋白阳性表达率;采用Western blot法检测3组细胞CaMKⅡ、磷酸化MEK(phosphorylated MEK, p-MEK)、MEK、p-ERK和ERK蛋白相对表达量,比较p-MEK/MEK、p-ERK/ERK;采用CCK-8实验检测3组细胞增殖率;采用流式细胞术检测3组细胞周期分布情况;采用ELISA法检测3组细胞培养上清液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)含量;采用Matrigel胶管腔形成实验检测3组原代人脐静脉内皮细胞HUVECs成管情况。结果胆管癌组织CaMKⅡmRNA相对表达量(4.58±0.48)、CaMKⅡ蛋白阳性表达率(95%)高于癌旁正常组织(1.00±0.06、10%)(P<0.05)。siRNA-CaMKⅡ组细胞CaMKⅡmRNA和蛋白相对表达量及p-MEK/MEK、p-ERK/ERK均低于空白对照组和siRNA-NC组(P<0.05),空白对照组与siRNA-NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。转染48、72 h后,siRNA-CaMKⅡ组细胞增殖率[(78.63±8.06)%、(69.71±7.03)%]低于空白对照组(100%、100%)和siRNA-NC组[(99.19±9.58)%、(99.02±9.72)%](P<0.05),空白对照组与siRNA-NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。转染48 h后,siRNA-CaMKⅡ组G0/G1期与S期细胞比率[(16.19±1.57)%、(17.39±1.83)%]低于空白对照组[(52.61±5.02)%、(20.31±2.15)%]和siRNA-NC组[(51.31±5.10)%、(25.23±2.61)%](P<0.05),G2/M期细胞比率[(66.41±6.72)%]高于空白对照组[(27.08±2.81)%]和siRNA-NC组[(23.46±2.30)%](P<0.05),空白对照组与siRNA-NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。siRNA-CaMKⅡ组细胞培养上清液中VEGF含量[(652.81±45.77)ng/L]和HUVECs管腔形成数(8.83±0.91)均低于空白对照组[(771.94±52.35)ng/L、17.58±1.84]和siRNA-NC组[(768.46±46.09)ng/L、15.89±1.66](P<0.05),空白对照组与siRNA-NC组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论胆管癌组织中CaMKⅡ呈高表达,下调HuCCT1细胞中CaMKⅡ表达可抑制细胞增殖,导致G2/M期阻滞,抑制血管生成,其机制可能与MEK/ERK信号通路有关。

• 单位
  海南医学院第二附属医院