摘要
目的 基于线粒体自噬研究抵当汤(DDT)对脑出血(ICH)后神经损伤的保护作用及机制。方法 应用自体血注入法建立ICH大鼠模型,氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞建立神经细胞缺氧模型,并应用DDT进行治疗。随机分为假手术(Sham)组、ICH组、脑血康(NXK,0.64 mg/100 g)组、ICH+DDT低、中、高剂量(0.13、0.26、0.52 g/100 g)组、线粒体自噬诱导剂CCCP阳性对照(CCCP,4 mg/kg)组、CoCl2(150μmol/L)组、CoCl2+DDT低、中、高剂量(50、100、200μg/ml)组。Longa评分法观察DDT对ICH大鼠神经功能缺损的保护作用,通过检测超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)含量探索DDT保护神经细胞氧化损伤的作用。利用Tunel染色和流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光染色法观察线粒体膜电位变化,Western印迹和免疫组化法检测DDT对线粒体自噬的调控作用。结果 DDT可以改善ICH神经功能评分,促进ICH后神经功能恢复;DDT能显著促进SOD、CAT及GSH-Px水平,显著降低MDA含量(P<0.05,P<0.01);DDT能显著减轻ICH病灶组织细胞凋亡,并能显著降低CoCl2诱导PC12细胞的凋亡率(P<0.01,P<0.001);DDT能恢复CoCl2诱导PC12细胞线粒体膜电位;DDT显著上调Parkin、PTEN诱导激酶(Pink)1和微管相关蛋白轻链(LC)3Ⅱ表达,显著抑制P62蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 抵当汤能够调控线粒体自噬抑制神经细胞氧化损伤和细胞凋亡。
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单位长春中医药大学附属医院; 长春中医药大学