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摘要
目的探讨重组变应原Der p1 T融合蛋白对屋尘螨粗提液诱导的哮喘小鼠特异性免疫治疗的效果。方法将30只雌性BALB/c小鼠随机均分为3组,分别为对照组、哮喘组和Der p1 T融合蛋白免疫治疗组(SIT组)。哮喘组和SIT组小鼠分别在第0、7、14天给予腹腔注射屋尘螨粗提液200μl/鼠(蛋白含量10μg/200μl),对照组小鼠注射等量PBS。哮喘组、SIT组小鼠于第21天采用屋尘螨粗提液雾化激发(蛋白浓度为0.5μg/ml),30 min/d,连续7 d,观察并记录小鼠哮喘发作情况,对照组使用等量PBS雾化激发。SIT组小鼠于第21天雾化前0.5 h,腹腔注射Der p1 T融合蛋白(100μg/ml) 200μl进行特异性免疫治疗,连续7d,对照组、哮喘组注射等量PBS。各组小鼠于末次雾化激发后24 h内取眼球血,收集血清,气管插管收集肺泡灌洗液(BALF),ELISA检测血清中特异性IgE和IgG2a抗体水平及BALF中细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4 (IL-4)、IL-10和IL-17A的含量;流式细胞仪检测脾组织中Th1/Th2和Th17/Treg细胞群落的改变;HE染色镜下观察小鼠肺组织病理形态。采用SPSS 18.0统计软件进行统计学分析。结果各组小鼠雾化激发后,对照组小鼠仅出现短暂的轻微烦躁症状,哮喘组小鼠表现出明显的烦躁不安、喘息、呼吸加快加深,SIT组小鼠经免疫治疗后,有轻微的喘息症状,症状较哮喘组小鼠有所改善。ELISA检测结果显示,哮喘组小鼠血清中特异性IgE抗体含量为(31.49±4.32) IU/ml,高于对照组的(8.53±1.92) IU/ml和SIT组的(16.68±2.45) IU/ml (P<0.01);哮喘组小鼠血清中抗原特异性IgG2a抗体含量为(19.56±3.89)μg/ml,低于对照组的(42.43±2.07)μg/ml和SIT组的(36.96±5.04)μg/ml (P <0.01)。哮喘组小鼠IFN-γ和IL-10水平分别为(134.23±22.49)和(22.43±8.27) pg/ml,低于对照组的(212.36±33.21)和(72.84±21.42) pg/ml (P<0.05、0.01);SIT组小鼠IFN-γ和IL-10水平分别为(183.76±24.66)和(61.05±7.97) pg/ml,与哮喘组相比,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。哮喘组小鼠IL-4和IL-17A水平分别为(165.45±34.59)和(464.21±41.36) pg/ml,高于对照组的(21.31±5.26)和(115.74±30.82)μg/ml (P<0.01);SIT组小鼠IL-4和IL-17A水平分别为(64.15±17.33)和(271.61±27.07) pg/ml,与哮喘组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,哮喘组小鼠脾组织CD4+T淋巴细胞中Th1和Treg细胞比例分别为2.8%和4.9%,较对照组的3.7%和10.3%显著降低(P<0.05、0.01);SIT组Th1和Treg细胞比例分别为3.1%和8.8%,较哮喘组小鼠的有所升高(P<0.05、0.01)。哮喘组Th2和Th17细胞比例分别为2.8%和2.2%,较对照组的1.0%和0.3%显著升高(P<0.01),SIT组Th2和Th17细胞比例分别为1.7%和0.6%,较哮喘组小鼠有所降低(P<0.01)。肺组织病理切片结果显示,哮喘组小鼠肺组织终末细支气管有明显炎性细胞浸润,支气管平滑肌纤维断裂,上皮细胞脱落;SIT组小鼠肺组织病理变化较哮喘组的有明显好转,支气管壁增厚减少,炎性细胞浸润情况得到改善。结论 Der p1T融合蛋白对哮喘小鼠的特异性免疫治疗有一定的效果。
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