内标多重荧光RT-PCR同时检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型

作者：肖性龙; 何雅青; 余以刚; 杨洪; 李惠芳; 杨晓泉; 张经纬; 陈谷; 刘冬梅; 李小凤; 吴晖

来源：微生物学报, 2009, 49(01): 98-104.

DOI：10.3321/j.issn:0001-6209.2009.01.017

• 内标
• 多重荧光RT-PCR
• EV71
• 柯萨奇病毒A16型
• 检测

【目的】为对当前爆发的手足口病进行快速准确的检测。【方法】本研究建立了含内标的同时检测EV71和CA16的多重荧光RT-PCR方法,对该方法的特异性、灵敏度等进行评估,并对400多份临床样品进行了检测。【结果】实验结果表明,该检测方法特异性强,对10株EV71病毒、8株CA16病毒和25株其他人类病毒进行了检测,特异性为100%;该检测方法对EV71和CA16的检测灵敏度分别达到0.1 TCID50和1 TCID50;将0.1~104TCID50/mL EV71和CA16样本进行重复性实验,其变异系数分别为0.9%~2.0%和0.9%~2.3%。对400多份临床样品分别进行荧光RT-PCR检测和传统方法检测,结果显示,荧光RT-PCR对EV71和CA16的阳性检出率平均为46.1%和14.2%,比传统方法(34.5%和12.8%)的阳性检测率高。另外,实验数据显示,在粪便、直肠拭子、咽喉拭子样本中,PCR抑制物存在的比例为1.8%~3.4%,表明内标对监控PCR抑制物的存在具有重要作用。【结论】本方法能同时对EV71和CA16进行快速检测,并且灵敏度高,特异性好,由于加入了内标,能有效地监控假阴性的出现,适合于手足口病的临床检测。

• 单位
  深圳太太基因工程有限公司; 华南理工大学; 深圳市疾病预防控制中心