松材线虫效应蛋白Bx-FAR-1的原核表达与活性测定

作者：李煜; 吴小芹^*; 胡龙娇

来源：南方农业学报, 2020, 51(11): 2731-2737.

• 松材线虫
• 效应蛋白
• 原核表达
• 蛋白纯化

【目的】纯化获得松材线虫效应蛋白Bx-FAR-1并验证其体外活性,为后续研究效应蛋白Bx-FAR-1参与松材线虫侵染松树的分子机制打下基础。【方法】利用PCR技术从松材线虫c DNA中扩增出效应基因Bx-FAR-1,用同源重组的方式将目的片段连接至原核表达载体p ET-32a(+)。通过原核表达系统诱导并纯化获得大量效应蛋白Bx-FAR-1,利用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting对纯化获得的蛋白进行鉴定,同时通过本氏烟瞬时表达系统验证蛋白活性。【结果】从松材线虫cDNA中成功扩增出Bx-FAR-1基因(BXY1685000.1);通过同源重组成功获得重组表达载体pET32a-BxFAR,并转化至大肠杆菌BL21感受态细胞。当诱导条件为15℃下150 r/min诱导16 h时重组蛋白以可溶性形式表达,且蛋白表达量高。效应蛋白Bx-FAR-1活性测定结果显示,当蛋白浓度达100 nmol/L时,可抑制致病疫霉的病原相关分子模式(PAMP)INF1引起的烟草细胞坏死。【结论】松材线虫效应蛋白Bx-FAR-1可抑制寄主植物的免疫反应。

• 单位
  南京林业大学; 江苏省有害生物入侵预防与控制重点实验室