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摘要
目的 构建结核分枝杆菌EspB及EspBN蛋白原核表达系统，表达并纯化重组蛋白，评价两种蛋白的免疫原性。方法 构建pGEX-4T-1-EspB及pGEX-4T-1-EspBN重组质粒，转化大肠埃希菌，经ITPG诱导表达后纯化获得目的蛋白。分别取两种蛋白与等体积弗氏完全佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠，在初次免疫后第14、28 d以相同剂量蛋白和弗氏不完全佐剂加强免疫。试验设PBS对照组。每鼠注射100μL PBS溶液与等体积的弗氏不完全佐剂，末次免疫后第14、28、42 d小鼠取眼球采血，分离血清，采用West ern blot法检测抗血清的特异性，ELISA法检测血清抗体效价及IgG亚型。分离免疫小鼠脾淋巴细胞，体外经相应抗原刺激后，CCK8法检测脾淋巴细胞增殖水平，ELISA法检测培养液上清中IL-4、INF-γ水平。结果 成功构建了高效原核表达重组质粒pGEX-4T-1-EspB及pGEX-4T-1-EspBN。重组质粒转化DE3后经IPTG诱导，稳定表达EspB融合蛋白和EspBN融合蛋白。分别用两种蛋白免疫小鼠，制备的抗血清均具有特异性，抗EspB蛋白血清与抗EspBN血清的总IgG及各亚型IgG效价均高于PBS组(均P<0.05)。EspB组和EspBN组脾淋巴细胞增殖刺激指数均高于PBS组(q值分别为7.17和3.47,均P<0.05)。免疫小鼠淋巴细胞经抗原刺激后IL-4释放水平均呈降低趋势，INF-γ释放水平均呈升高趋势(均P<0.05)。结论 结核分枝杆菌EspB蛋白及EspBN蛋白均具有较强的免疫原性，为进一步分析其动物免疫保护效应等研究奠定了基础。
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