融合型乳酸片球菌素在大肠杆菌中的表达与纯化

作者：宋建民; 孙爱友; 魏东芝

来源：南京理工大学学报, 2011, (02): 268-272.

DOI：10.14177/j.cnki.32-1397n.2011.02.004

• 乳酸片球菌素
• 大肠杆菌
• 融合蛋白
• 表达
• 纯化 pediocin PA-1
• escherichia coli
• fusion protein
• expression
• purification

为在大肠杆菌中高效表达乳酸片球菌素(PED),按照美国国立生物技术信息中心公布的PED基因序列设计合成引物,以乳酸片球菌基因组DNA为模板,用多聚酶链式反应扩增PED结构基因特异片段,构建编码组氨酸标记硫氧还原蛋白融合PED的重组表达质粒pET32c-PED,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。在异丙基硫代半乳糖苷诱导后融合蛋白以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的28%。经镍亲合层析纯化的融合蛋白用肠激酶裂解,再经超滤纯化,可得78%的收率。融合蛋白没有抗粪肠球菌细菌素活性,被分开的PED恢复了抑菌活性。

• 单位
  合肥学院; 生物反应器工程国家重点实验室; 华东理工大学