MAGE-D4a融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定

作者：贺菽嘉; 肖绍文; 罗彬; 蓝秀万; 林文珍; 林永达; 谢小薰

来源：中国免疫学杂志, 2010, (05): 432-435+440.

• 黑色素瘤相关抗原-D4a
• 原核表达
• 纯化
• 融合蛋白 MAGE-D4a
• Prokaryotic expression
• Purification
• Fusion protein

目的:构建肿瘤相关抗原MAGE-D4a的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:PCR法从胶质瘤组织cDNA中扩增MAGE-D4a基因全长编码区,连接入原核表达载体pMAL-c2,筛选、鉴定阳性克隆并测序。将重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达,表达产物经AmyloseResin亲和层析分离纯化,并且对纯化的融合蛋白进行质谱鉴定。结果:成功扩增了MAGE-D4a基因;重组质粒在Rosetta大肠杆菌中诱导表达出MBP/MAGE-D4a融合蛋白;优化了MAGE-D4a原核表达体系的最适条件;蛋白质谱分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符。结论:获得了高效表达、可溶性的MA...

• 单位
  广西医科大学; 广西医科大学第一附属医院