钙调蛋白突变体CaMD130G和CaMD96V的制备提取与纯化

作者：封瑞; 袁媛; 苏敬阳; 孙旋旋; 彭羽; 康泽; 赵君; 郝丽英; 曾晓荣^*

来源：解剖科学进展, 2018, 24(05): 486-492.

DOI：10.16695/j.cnki.1006-2947.2018.05.011

• 钙调蛋白
• 突变体
• 融合蛋白
• 长QT综合征

目的制备纯化钙调蛋白突变体CaMD130G和CaMD96V的蛋白,为后续体外实验研究提供高浓度高纯度的突变体蛋白奠定基础。方法采用基因重组将重组质粒pGEX-6P-3/GST-CaMD130G和pGEX-6P-3/GST-CaMD96V转化入大肠杆菌,在大肠杆菌中诱导表达相应的蛋白,再采用超声破碎法制备融合蛋白,并且采用Precission protease进行酶切,SDS-PAGE确认制备蛋白的浓度与纯度,Pull-down assay的方法检测蛋白的活性。结果本研究制备了较高浓度与纯度的钙调蛋白突变体CaMD130G和CaMD96V蛋白,CaMD130G蛋白能浓度依赖性地与心肌钙通道蛋白片段CT1结合,而CaMD96V蛋白能浓度依赖性地与心肌钙通道蛋白片段pre-IQ结合,制备的CaMD130G和CaMD96V蛋白具有很好的活性。结论基因重组、超声破碎的方法能制备高浓度、高纯度以及高活性的突变体CaMD130G和CaMD96V蛋白,为进一步研究奠定坚实的基础。

• 单位
  中国医科大学; 西南医科大学