1型肺炎球菌荚膜多糖中十六烷基三甲基溴化铵含量反相高效液相色谱检测方法的建立及验证

作者：陈思; 邓前; 曾华英; 邹莎莎; 张伟; 但傲欢; 廖红梅; 赵静; 刘威^*

来源：中国生物制品学杂志, 2020, 33(10): 1192-1200.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003180

• 1型肺炎球菌荚膜多糖
• 十六烷基三甲基溴化铵
• 反相高效液相色谱
• 脱氧胆酸钠

目的建立检测1型肺炎球菌荚膜多糖(简称Pn1型多糖)中残留十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)含量的反相高效液相色谱(reversed-phasehigh performance liquid chromatography,RP-HPLC)方法,并进行验证。方法色谱条件:选用反相色谱柱Waters/XSelect CSH C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为含三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)的10%甲醇水溶液,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为20℃,检测波长为206 nm。优化流动相甲醇中TFA的比例(0.01%、0.05%和0.1%)。Pn1型多糖用100μg/mL脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,DOC)水溶液溶解,超滤离心后上样。验证方法的专属性、线性范围、灵敏度、准确性及重复性。应用该方法检测3批Pn1型多糖样品CTAB残留量。结果选择含0.01%TFA的10%甲醇水溶液作为流动相;加标样品除有CTAB对照品色谱峰外,还有2个杂质峰,且3个峰均达到基线分离,表明方法专属性良好;CTAB对照品在0.2～4.0μg/m L浓度范围内与峰面积线性良好,r2> 0.999;检出限及定量限分别为0.1和0.2μg/mL;0.2、0.4及0.6μg/mL浓度的加标样品回收率分别为101.18%、100.85%和101.72%,平行检测3次的RSD分别为1.69%、1.98%和0.76%。3批样品CTAB残留量均<0.324μg/mL,符合内控要求。结论成功建立了检测Pn1型多糖中残留CTAB含量的RP-HPLC法,该方法具有良好的专属性、线性、准确性,灵敏度高,重复性好,可用于肺炎球菌荚膜多糖中的残留CTAB检测。