多房棘球绦虫基因组DNA三种提取方法的比较

作者：王明坤; 孜比姑·肉素; 李德伟; 余倩; 李静; 张传山; 王慧^*

来源：新疆医科大学学报, 2023, 46(07): 875-886.

• 多房棘球绦虫
• 原头节
• 囊壁
• 基因组DNA
• 提取

目的 综合比较95℃水浴法、碱裂解法及离心柱法提取多房棘球绦虫虫体基因组DNA的质量差异，筛选出适用于PCR鉴定多房棘球绦虫线粒体DNA分型的DNA提取方法。方法 无菌条件下取适量多房棘球绦虫原头节(Protoscoleces, PSCs)、囊壁组织样本为实验材料，分别采用95℃水浴法、碱裂解法及离心柱法提取虫体样本中的基因组DNA,检测其浓度与A260/A280比值，并以提取的DNA为模板，通过PCR扩增多房棘球绦虫核基因延伸蛋白样蛋白(Ezrin/radixin/moesin-like protein,elp)和线粒体基因细胞色素b(Cytochrome b,cob)、NADH脱氢酶亚基2(NADH dehydrogenase subunit 2,nad2)和细胞色素c氧化酶亚基I(Cytochrome c oxidase subunit 1,cox1)的片段，综合比较3种方法提取的基因组DNA扩增效果。结果 3种方法均可从PSCs中提取出基因组DNA,琼脂糖凝胶电泳和核酸定量结果显示离心柱法提取的基因组DNA A260/A280比值最高，差异具有统计学意义(P<0.01),且在加样模板总量一致的情况下，以离心柱法提取的PSCs DNA为模板扩增的cob、nad2和cox1基因产物电泳条带清晰、明亮，片段长度准确；而使用95℃水浴法和碱裂解法提取的PSCs基因组DNA仅有效扩增出cob基因条带。通过离心柱法提取的囊壁组织DNA为模板仅扩增出elp基因片段，小鼠组织基因组DNA未扩增出任何虫体的目的基因片段。结论 使用离心柱法从多房棘球绦虫PSCs中提取的基因组DNA质量最佳，能够有效扩增出虫体线粒体基因片段，且无宿主来源细胞的污染，可满足后续实验室对多房棘球绦虫不同虫株的基因型鉴定研究。

• 单位
  新疆医科大学第一附属医院; 新疆医科大学; 基础医学院