百草枯染毒肺泡上皮细胞中KCa3.1对NLRP3炎症小体的调控作用

作者：孟潇潇; 朱勇; 杨雯雨; 张嘉祥; 王瑞兰; 田锐^*

来源：中华急诊医学杂志, 2020, 29(06): 805-809.

• 百草枯
• 肺纤维
• 中毒
• NLRP3炎症小体
• 中电导钙激活钾通道3.1
• NIMA相关激酶7
• 钾离子外流
• 肺泡上皮细胞

目的探讨百草枯(PQ)染毒肺泡上皮细胞内KCa3.1对NLRP3炎症小体的调控作用。方法体外培养A549细胞,分为对照组、TRAM-34(KCa3.1的特异性抑制剂)组、PQ组及PQ+TRAM-34组。免疫荧光检测细胞中KCa3.1的变化。Western Blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白及NIMA相关激酶7(NEK7)蛋白的表达。细胞钾离子浓度变化比色法定量检测试剂盒检测钾离子的变化。结果免疫荧光结果提示A549细胞染毒后,KCa3.1表达明显增加。Western Blot结果提示PQ处理后,A549细胞内NLRP3炎症小体(相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1)及NEK7蛋白表达明显升高;抑制KCa3.1后,NLRP3炎症小体及NEK7表达减少;且差异具有统计学意义[NLRP3蛋白(NLRP3/β-actin,对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组):[(0.02±0.00)vs (0.03±0.00)vs (0.74±0.00)vs (0.32±0.01)];ASC蛋白(ASC/ β-actin,对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组): [(0.12±0.01)vs(0.11±0.03)vs(0.46±0.02)vs(0.17±0.03)];Caspase-1蛋白(Caspase-1/ β-actin,对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组):[(0.05±0.00)vs 0.04±0.00)vs (0.34±0.03)vs(0.15±0.01)];NEK7蛋白(NEK7/ β-actin,对照组比染毒组比染毒+抑制剂组):[(0.38±0.03)vs (0.83±0.02)vs (0.51±0.01),均P<0.01]。比色法检测结果提示PQ处理后细胞内钾离子明显下降,抑制KCa3.1后细胞内钾离子下降明显减少;且差异有统计学意义(对照组比染毒组比染毒+抑制剂组:[(1.00±0.00)vs (0.60±0.05)vs(0.86±0.02),均P<0.01]。结论 PQ中毒后,可能激活KCa3.1促使细胞内钾离子外流,上调NEK7表达,从而激活NLRP3炎症小体,促进肺纤维化的发生。

• 单位
  上海交通大学