食品检测用肠道侵袭性大肠埃希氏菌标准物质的研制

作者：赵琳娜; 王学硕; 刘娜; 崔生辉^*; 路勇^*

来源：中国食品卫生杂志, 2021, 33(06): 807-814.

DOI：10.13590/j.cjfh.2021.06.029

• 致泻大肠埃希氏菌
• 肠道侵袭性大肠埃希氏菌
• 基因组DNA
• 标准物质
• 全基因组测序
• 毒力基因

目的为满足肠道侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)准确检测的实验室质量控制和能力验证需求,研制具有我国自主知识产权、稳定性良好且具有清晰基因组信息背景的即用型EIEC标准物质。方法利用二代高通量测序技术对EIEC(CMCC 44840)进行全基因组测序,明确CMCC 44840的种属、血清型、多位点序列分型(MLST)和毒力基因;采用冷冻干燥技术制备活菌含量为103 CFU的EIEC冻干样品;参照CNAS-GL017-2018进行均匀性检验,并采用单因素方差分析对结果进行统计分析;将样品分别于-20℃、4℃、25℃和37℃条件下保藏,对其储藏稳定性和运输性进行评价;利用5种食品基质样本进行标准物质的使用效果验证,同时组织3家实验室进行协同标定。结果 CMCC 44840基因组大小为4.96 Mb, GC含量为50.7%,编码基因5 424个,种属鉴定结果为大肠埃希氏菌,血清预测结果为O28ac:H7,MLST为ST311型,携带ipaH、virB、virF等毒力基因;制备的EIEC冻干样品均匀性检验结果F=1.79,符合标准物质均匀性要求;冻干样品在25℃和4℃下保藏7 d,-20℃和4℃下保藏60 d,菌含量均保持在103CFU水平,在37℃下第3 d菌含量出现下降,低于103CFU水平;添加EIEC冻干样品的20件不同食品基质样品经增菌后均检出EIEC;3家协同标定实验室测定EIEC冻干样品菌含量均为103 CFU,且实验室间无显著性差异(F=0.59)。结论本研究所制备的EIEC标准物质所用菌株具有清晰的基因组序列信息,均匀性和稳定性均符合要求,适用性良好,能够满足食品检测实验室的质量控制和能力验证的需求。

• 单位
  中国食品药品检定研究院