携带TPH-2基因小分子干扰RNA表达载体的构建与鉴定

作者：石永勇; 洪庆雄; 肖建斌; 招伟贤; 卢传坚; 项红兵

来源：中华实验外科杂志, 2011, (11): 1981-1982.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2011.11.057

• 色氨酸羟化酶
• RNA干扰
• 表达载体

目的构建携带色氨酸羟化酶(TPH)-2基因的小分子干扰RNA表达载体。方法设计并合成shRNA TPH-2对应的两条互补的寡核苷酸链,pU6-CMV-GFP质粒经Age I和EcoR I双酶切与退火后的寡核苷酸连接,目的质粒转化感受态细胞,对长出的克隆应用菌落聚合酶链反应(PCR)鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析。结果经PCR、酶切及测序证实,pU6-CMV-GFP-TPH-2 shRNA表达载体片段大小为332 bp,其中插入的片段序列和位点与预期完全一致。结论实验成功构建pU6-CMV-GFP-TPH2 shRNA表达载体。

• 单位
  广东省中医院; 华中科技大学同济医学院附属同济医院