hTERT启动子调控p53基因表达逆转录病毒的抗肿瘤作用

作者：黄明文; 余新; 洪葵; 刘天德; 邵江华

来源：中国临床医学, 2008, (03): 429-432.

DOI：10.3969/j.issn.1008-6358.2008.03.058

• 人端粒酶逆转录酶基因启动子
• p53基因
• 逆转录病毒

目的:观察人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因启动子驱动野生型p53的新型逆转录病毒对肿瘤的杀伤作用。方法:先将前期构建的逆转录病毒穿梭质粒pLHCX-hTERT-EGFP和pLHCX-hTERT-wtp53进行包装,通过浓缩获得高滴度病毒液。然后将逆转录病毒pLHCX-hTERT-wtp53感染包含突变型p53的大肠癌细胞系SW620,通过RT-PCR和Westernblot证实p53mRNA和p53蛋白的表达。最后将逆转录病毒pLHCX-hTERT-wtp53和pLHCX-hTERT-EGFP感染hTERT阳性的人大肠癌细胞株SW620,人肺癌细胞株A549和hTERT阴性的正常人胚肺成纤维细胞MRC-5,观察其特异性杀伤作用;另外通过裸鼠皮下注射肿瘤细胞SW620和A549,建立肿瘤模型,应用逆转录病毒pLHCX-hTERT-wtp53治疗后测量肿瘤体积计算肿瘤生长抑制率。结果:获得病毒液的滴度分别为2.3×107CFU.mL-1和3.5×107CFU.mL-1。逆转录病毒pLHCX-hTERT-wtp53经RT-PCR证实p53mRNA的表达,经Westernblot检测到p53蛋白表达。重组逆转录病毒导入外源的野生型p53基因后,通过流式细胞检测到hTERT阳性人大肠癌细胞株SW620,人肺癌细胞株A549凋亡率远高于hTERT阴性的正常人胚肺成纤维细胞MRC-5(P<0.05)。体内实验证实各组通过逆转录病毒pLHCX-hTERT-wtp53治疗后的肿瘤体积明显小于对照组(P<0.05)。结论:获得的新型逆转录病毒对肿瘤有特异性的杀伤作用。

• 单位
  南昌大学第二附属医院