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摘要
肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)是重要条件致病菌之一，它是社区获得性和院内感染相关的重要病原体，可导致肺炎、尿路感染、败血症、肝脓肿等。目前KP多重耐药问题严峻，开发疫苗预防其感染尤为必要。外膜蛋白是肺炎克雷伯菌的主要毒力因子之一，OMPA、OMPN、CusC富含大量保守区，是研制KP疫苗的理想候选蛋白。该研究通过原核系统表达重组肺炎克雷伯菌抗原表位融合蛋白，并对其免疫原性进行验证。通过计算机分析筛选出KP外膜蛋白OMPA、OMPN、CusC高度保守的抗原表位，将多个表位串联成融合蛋白，构建大肠杆菌重组系统表达KP融合蛋白，用镍离子螯合层析技术纯化目的蛋白，蛋白配伍不同的佐剂分组免疫小鼠，检测小鼠血清抗体效价及相关细胞因子水平以评价融合蛋白诱导的体液免疫和细胞免疫效果，对比各组之间免疫效果的差异，筛选最佳免疫方案。表达出的重组融合蛋白主要以包涵体的形式存在，经变复性处理后得到可溶性的融合蛋白；重组融合蛋白免疫小鼠后产生了高效价特异性抗体，搭配佐剂可以提高抗体效价，其中MF59佐剂和CpG佐剂增强作用最好，其次是铝佐剂；免疫后的小鼠可产生细胞免疫，搭配佐剂可以提高细胞免疫的效果，其中MF59佐剂的促进作用最优，其次是CpG佐剂，再者是铝佐剂。本研究设计的肺炎克雷伯菌融合蛋白具有良好的免疫原性，能同时诱导体液免疫和细胞免疫应答，搭配佐剂可显著增强免疫效果，为亚单位疫苗的研制奠定了基础。
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