人hCGβ真核表达载体的构建及稳定转染B16细胞系的建立

作者：张亮; 王宇; 江乐; 阎瑾琦; 王越; 胡明明; 于继云

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2010, (07): 623-626.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.005761

• hCGβ
• 稳定转染
• 小鼠黑色素瘤细胞
• 肿瘤免疫治疗 hCGβ
• stably transfection
• mouse melanoma cell
• tumor immunotherapy

目的:构建人hCGβ真核表达载体,稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,建立稳定表达人hCGβ的小鼠黑色素瘤细胞系。方法:采用PCR方法扩增出人hCGβ全长基因的cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo中,并加入酶切位点和6×His标签,得到重组表达质粒pIRES-neo-hCGβ-(His)6。利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418加压筛选出阳性克隆。RT-PCR、Westernblot及免疫荧光检测人hCGβ在B16细胞中的表达。结果:经限制性内切酶鉴定及序列分析,pIRES-neo-hCGβ-(His)6重组体构建正确...

• 单位
  军事医学科学院基础医学研究所