抗汉城病毒荧光单克隆抗体的制备及初步应用

作者：张雨薇; 彭言峰; 刘双军; 陈子杨; 韩德明^*; 李景良; 常军亮^*

来源：国际生物制品学杂志, 2022, 45(04): 181-186.

• 肾综合征出血热
• 汉城病毒
• 荧光单克隆抗体
• 灭活验证

目的制备抗汉城病毒(Seoul virus, SEOV)荧光单克隆抗体(单抗), 并初步应用于Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液的病毒灭活验证。方法以SEOV L-99株灭活病毒原液为免疫原, 采用小鼠杂交瘤细胞融合技术, 筛选抗SEOV特异性单抗杂交瘤;小鼠体内诱生法制备单抗腹水, 蛋白A亲和层析纯化单抗, 并以蛋白质印迹法鉴定其特异性;间接ELISA测定单抗效价和相对亲和力;纯化单抗采用搅拌法标记异硫氰酸荧光素, 并分别采用直接免疫荧光法与小鼠脑内接种法对Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液进行病毒灭活验证。结果共筛选出4株特异性抗SEOV L-99株杂交瘤1D5、2E3、3A4及5B7。蛋白质印迹法鉴定4株单抗均与SEOV L-99株核衣壳蛋白发生特异性反应;间接ELISA测定腹水效价为3.13×10-8～1.25×10-7;相对亲和力顺序为1D5>3A4>2E3>5B7;纯化抗体纯度>95%;异硫氰酸荧光素标记1D5株单抗的结合比率为3.4;直接免疫荧光法与小鼠脑内接种法检测盲传3代的Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗原液, 病毒灭活验证结果一致。结论成功筛选到高效价特异性抗SEOV单抗, 并制备成荧光单抗, 可用于Ⅱ型肾综合征出血热灭活疫苗生产工艺中的病毒灭活验证。

• 单位
  生命科学技术学院; 长春理工大学; 长春生物制品研究所