滨蒿内酯在BeWo细胞模型上的摄取转运特性分析

作者：曹慧敏; 董迎; 狄留庆; 赵晓莉^*

来源：药物评价研究, 2021, 44(06): 1181-1189.

• 茵陈
• 滨蒿内酯
• 妊娠期胆汁淤积
• BeWo细胞
• 胎盘屏障
• 摄取
• 被动转运
• 超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)

目的研究茵陈活性成分滨蒿内酯在BeWo细胞模型上的跨胎盘摄取转运特性。方法建立滨蒿内酯及内标物质双氯芬酸钠在细胞裂解液、Hank’s平衡盐溶液(HBSS)中的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法,并进行了方法学验证;MTT法考察滨蒿内酯(1、5、20、50、100、200、400、800、1 000μmol/L)作用4 h对BeWo细胞活性的影响;应用建立的UPLC-MS/MS法考察给药时间、药物浓度、温度、pH值、转运蛋白抑制剂对BeWo细胞摄取滨蒿内酯的影响;以BeWo单层细胞为体外模型,应用Transwell孔板,考察给药时间、药物浓度、转运蛋白抑制剂对滨蒿内酯的跨胎盘转运的影响。结果建立的UPLC-MS/MS分析方法专属性强,灵敏度高,重现性好,提取回收率、基质效应和样品稳定性等均符合生物样品药物含量的分析测定要求。滨蒿内酯在浓度为1～800μmol/L时对BeWo细胞无明显毒性作用。滨蒿内酯在BeWo细胞上的摄取随时间和浓度变化呈线性增加,在所选取的浓度范围内无饱和趋势,不符合米氏方程;滨蒿内酯在BeWo细胞上的摄取量在4℃和37℃条件无显著性差异,表明摄取转运过程不受温度的影响;与生理条件下(pH 7.4)比较,在酸性条件下(pH 5.0或6.5),摄取量略有降低,无显著性差异;碱性条件下(pH 8.6),摄取量显著减少(P<0.001);滨蒿内酯在细胞膜刷状缘侧的摄取不受各类膜转运蛋白底物或抑制剂的影响。滨蒿内酯在BeWo细胞上的2个方向的转运速率无显著差异;二者表观渗透系数(Papp)值极为接近,药物外排率(Pratio)约为1;在考察的浓度范围(5、50、100、200、400μmol/L)内,滨蒿内酯在母-胎和胎-母2个方向上转运均呈线性增加,且无饱和趋势;滨蒿内酯在BeWo单层细胞的转运不受各类膜转运蛋白底物或抑制剂的影响。结论滨蒿内酯在BeWo细胞上的摄取及跨膜转运机制为非载体蛋白介导的被动转运。

• 单位
  江苏省中药高效给药系统工程技术研究中心; 南京中医药大学