RNA干涉抑制宫颈癌HPV16E6基因的研究

作者：牛晓宇; 彭芝兰; 段伟强; 王和; 陈悦悦; 范余娟; 程易凡; 钱晓蕾

来源：四川大学学报（医学版）, 2006, (01): 14-18.

• RNA干涉
• HPV16
• E6
• 宫颈癌
• 基因治疗

目的采用RNA干涉(RNAI)技术干扰宫颈癌HPV16E6基因转录,通过体外和体内实验了解其特异性抑制HPV16E6基因的效率。方法设计合成针对HPV16E6的小干扰RNA(SIRNA),借脂质体转染宫颈癌CASKI细胞,通过测定转染后不同时间点的细胞凋亡率、HPV16E6MRNA及蛋白表达变化了解基因抑制的效率。体内实验中建立子宫颈癌荷瘤裸鼠模型,将E6SIRNA直接注入瘤体,观察肿瘤体积的变化,肿瘤切片HPV16E6免疫组化染色,观察肿瘤坏死和细胞的凋亡。结果HPV16E6SIRNA转染细胞后24H、48H、5D和9D时凋亡率分别为7.7%、11.8%、37.4%和12.6%。RT-PCR显示转染后24H、48H、5D和9D HPV16E6MRNA量减少了77%、83%、59%和41%。WESTERN BLOT显示转染后的HPV16E6蛋白表达在24H、48H、5D明显减少,9D时有所恢复;流式细胞仪HPV16E6蛋白定量测定结果显示,转染后24H、48H、5D和9D蛋白表达抑制率分别为79.7%、80.4%、71.3%和57.4%。体内实验瘤内注射HPV16E6SIRNA明显抑制肿瘤的生长,HPV16E6蛋白表达明显受抑,肿瘤组织坏死和细胞凋亡增加,重复给药较单次给药效果更好。结论体内和体外实验均表明RNA干涉HPV16E6基因的效果具有特异性和高效性。

• 单位
  四川大学华西医院; 四川大学华西第二医院; 浙江大学