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摘要
本发明提供了一种无抗性标记基因枯草表达重组质粒及其构建方法与应用。本发明利用枯草芽孢杆菌SCK6超级感受态直接构建不含大肠杆菌复制起始位点Ori及氨苄抗性基因的Bsggt重组表达质粒,能够获得更小的游离质粒表达系统,为异源蛋白在生产应用过程中提供了更小质粒的稳定表达工具。本发明使用Cas9n-AID碱基编辑技术进行无抗性标记表达质粒的构建对于菌株的筛选过程简单,所构建的无抗性标记表达质粒相对于传统的穿梭质粒更小,且表达过程中不需要添加诱导剂进行蛋白的诱导表达,由于表达质粒无抗性标记,在培养过程中由于没有抗生素的压力生长速度能明显提高,高表达的同时无抗生素的引入更适用于食品安全级别的生产应用。
- 单位
