ETEC 987P、K88二价重组干酪乳酸菌的构建及免疫仔猪效果评价

作者：杨雨晴; 李颖; 蔡昌福; 乔志刚; 王桂华; 王北艳; 余丽芸; 侯喜林^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2023, (14): 102-139.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2022.04.0184

• 重组干酪乳杆菌
• 产肠毒素大肠杆菌
• 987P
• K88
• 仔猪
• 免疫效果

为了制备产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC)987P和K88的二价重组乳杆菌，并检测其免疫效果，试验根据ETEC C83916株(GenBank登录号M35257.1)987P基因序列和ETEC C83902株(GenBank登录号M29375.1)K88基因序列设计合成特异性引物，将PCR扩增的987P、K88基因连接至穿梭载体pHCE1LB-pgsA(简称pLA),热激法转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，经PCR、双酶切鉴定为阳性的重组质粒电转化入干酪乳杆菌中，通过Western-blot、间接免疫荧光检测目的蛋白的表达情况。将50头健康的初生仔猪分为试验组和对照组，试验组初生仔猪通过口服免疫重组干酪乳杆菌菌液(浓度为1×109 cfu/mL),对照组口服等体积生理盐水，连用5 d,在免疫前称量体重，并于免疫前(第0天)及免疫后第5,10,15,20,25天采集血液和粪便，采用ELISA检测血清IgG抗体和粪便中sIgA抗体水平；免疫后10天试验组和对照组分别随机选取20头仔猪用ETEC C83916株和C83902株进行攻毒，计算攻毒保护率，试验结束后称量仔猪体重。结果表明：成功构建了重组菌pLA-987P-K88/L.casei,Western-blot检测显示pLA-987P-K88/L.casei在85 ku处出现明显条带，在荧光显微镜下pLA-987P-K88/L.casei可观察到明显的绿色荧光。初生仔猪免疫重组菌pLA-987P-K88/L.casei后5～25 d, IgG抗体和sIgA抗体水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。重组菌对ETEC C83916的攻毒保护率为90%,对ETEC C83902的攻毒保护率为80%。说明ETEC 987P、K88二价重组干酪乳酸菌可以有效抑制仔猪感染ETEC,大大降低新生仔猪腹泻率。

• 单位
  动物科技学院; 生命科学技术学院; 黑龙江八一农垦大学