ELISA法检测人血清中重组人信号调节蛋白α-抗CD20人鼠嵌合抗体融合蛋白IMM0306的方法学建立和验证

作者：靖钰; 姚慕蓉; 李松; 陈典泽; 张力; 杨勇; 钟勘; 宗山海^*

来源：药学学报, 2021, 56(09): 2367-2371.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2021-0591

• CD47
• 抗体融合蛋白
• ELISA
• 药代动力学

IMM0306是重组人信号调节蛋白α-抗CD20人鼠嵌合抗体融合蛋白,拟在临床中治疗难治或复发性CD20阳性B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)。本文建立了ELISA法(酶联免疫吸附法)用于评价人血清中IMM0306的药代动力学。该实验获得中国医学科学院肿瘤医院伦理委员会批准(批准号:CTR20192612)。用重组人CD47蛋白包被过夜, 5%脱脂奶粉封闭2 h,洗涤板后,按照板位图每孔加入100μL样本孵育1.5 h,洗涤后加入生物素标记的检测抗体anti-IMM0306-biotin并孵育1 h,随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素孵育1 h,显色并检测。捕获试剂的最佳包被浓度为2μg·mL-1,检测试剂anti-IMM0306-biotin和链霉亲和素-HRP的最佳稀释度分别为1∶500和1∶5 000。该方法的定量下限为4 ng·mL-1,标准曲线范围是4～100 ng·mL-1。方法的验证结果均满足相应的接受标准,可以用于IMM0306临床药代动力学研究。