禽呼肠孤病毒σB和σC蛋白在昆虫细胞中的共表达

作者：王盛; 谢芝勋^*; 沈文康; 谢丽基; 范晴; 罗思思; 张艳芳; 曾婷婷; 黄娇玲; 张民秀; 谢志勤; 邓显文

来源：中国畜牧兽医, 2020, 47(05): 1342-1349.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2020.05.006

• 禽呼肠孤病毒(ARV)
• σB基因
• σC基因
• 杆状病毒表达系统
• sf9细胞

本研究旨在获得具有天然构象和活性良好的禽呼肠孤病毒(ARV)σB和σC蛋白,采用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中共表达σB和σC蛋白,并对其活性进行鉴定。根据NCBI数据库中ARVσB和σC基因序列设计引物,将两个基因克隆至pFast-Dual载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭杆粒。通过转染sf9细胞,筛选到含有σB和σC基因的重组病毒。将重组病毒感染sf9细胞,通过优化接毒量和收获时间等参数,确定最佳表达条件,在sf9细胞中高效共表达σB和σC蛋白。Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测结果表明,成功在sf9细胞中共表达了ARVσB和σC蛋白,并具有很好的生物学活性。本试验结果为开发鉴别诊断试剂以及ARV颗粒疫苗的研究奠定了基础。

• 单位
  广西壮族自治区兽医研究所